小鼠Orai1基因真核表达载体myc-Orai1的构建

摘要

目的：构建小鼠Orai1基因的真核表达载体myc-Orai1(△4aa). 方法：从小鼠脑组织中提取总RNA,RT-PCR扩增Orai1(△4aa)序列,所得片段及真核表达载体pRK5-myc用SalⅠ和NotⅠ双酶切,后连入pRK5-myc载体中.重组质粒经SalⅠ和NotⅠ双酶切鉴定后送公司测序. 结果：PCR扩增得到预期900bp大小的目的片段,经SalⅠ和NotⅠ双酶切鉴定正确重组质粒送公司测序,结果与预期一致. 结论：成功构建myc-Orai1(△4aa)载体,为后续研究提供了条件.通过查阅文献。初步拟定了可能与Orail有相互作用的蛋白如PICK1，推测Orail和PICK1可能共同表达于神经元和肌纤维中。设计不同引物可以扩增出各种所需突变体。测序结果通过比对，与预期相符，说明载体构建成功。可以用于后续验证相互作用及机制的实验。