胸膜肺炎放线杆菌apxIA基因在不同宿主系统中的表达和分析

摘要

用PCR方法从胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清1型参考株259的基因组DNA中,扩增约954bp的apxIA基因片段,分别构建大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1/apxIA和毕赤酵母表达栽体pPICzαA/apxIA.对目的基因密码子偏好性进行分析,发现其中有4个大肠杆菌稀有密码子,占1.2%:有49个毕赤酵母稀有密码子,占15.4%.利用所构建的大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1/apxIA和毕赤酵母表达载体pPICZαA/apxIA分别进行表达.结果显示,目的基因在大肠杆菌中能以包涵体的形式进行高效表达,其融合蛋白占菌体总蛋白的32%;在毕赤酵母中则以较低水平分泌表达至培养基的上清液中,40倍浓缩后方能检测到少量的目的蛋白.实验结果证明,目的基因序列中的密码子偏好性影响其在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达.