声明
英汉缩略语名词对照
前言
第一部分 体外分析OPG对肝细胞胰岛素信号的影响
1 实验材料
1.1 肝细胞株及细胞培养
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 主要试剂配制
2 实验方法
2.1 细胞培养，胰岛素抵抗模型建立
2.2 细胞总蛋白的提取
2.3 蛋白浓度的测定（BCA法）
2.4 Western blot
2.5 过碘酸雪芙染色（PAS）
2.6 糖原含量测定
2.7 葡萄糖摄取试验（2-NBDG）
2.8 数据统计学分析
3 结果
3.1 OPG病毒感染肝模型细胞后OPG mRNA和蛋白的过表达
3.2 葡萄糖胺及FFAs造胰岛素抵抗模型成功
3.3 过表达OPG后,糖原合成减少，糖摄取降低
3.4 OPG过表达对胰岛素信号通路和糖异生的影响
3.5 抑制OPG后,糖原合成增多，糖摄取增加
3.6 OPG抑制后对胰岛素信号通路和糖异生的影响
4 讨论
第二部分 OPG基因敲除对高脂诱导的小鼠肝脏胰岛素抵抗的影响
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验试剂
1.3 实验仪器
1.4 实验试剂配制
2 实验方法
2.1 小鼠基因型鉴定
2.2 实验分组及构建胰岛素抵抗模型鼠
2.3 血清生化指标的检测
2.4 肝脏糖原含量检测
2.5 肝脏组织组织切片及糖原染色（PAS）
2.6 组织细胞总mRNA的提取
2.7 mRNA逆转录实验
2.8 荧光定量PCR（Q-PCR）
2.9 组织蛋白提取及western blot
2.10 数据统计分析
3 结果
3.1 小鼠基因型鉴定结果
3.2 OPG基因敲除鼠与野生型鼠代谢指标的比较
3.3 小鼠GTT（Glucose Tolerance Test）, ITT（Insulin Tolerance Test）检测
3.4 小鼠肝脏糖原含量及切片糖原染色
3.5 各组小鼠肝脏糖代谢相关基因mRNA的变化
3.6 各组小鼠肝脏糖代谢相关基因蛋白的变化
3.7 OPG敲除改变了小鼠肝脏mTORC1活性和胰岛素信号
4 讨论
第三部分 OPG调节肝细胞胰岛素敏感性的相关机制研究
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验试剂
1.3 实验试剂配制
2 实验方法
2.1 小鼠肝原代细胞分离培养
2.2 细胞培养处理
2.3 截短质粒构建
2.4 质粒转化及保菌
2.5 质粒提取
2.6 细胞质粒转染
2.7 细胞免疫荧光染色
2.8 免疫共沉淀
2.9 Phos-tag电泳
2.10 数据统计分析
3 结果
3.1 细胞内OPG表达的荧光图
3.2 OPG重组蛋白作用于细胞的最适浓度
3.3 OPG能够增强mTORC1的活性并且抑制胰岛素信号的传导
3.4 OPG敲除使mTORC1的活性减低并且改善胰岛素抵抗状态
3.5 OPG处理后TSC2活性不产生变化，雷帕霉素的加入不影响细胞OPG蛋白的表达水平
3.6 mTORC1抑制剂Rapamycin作用后OPG对胰岛素信号的调节作用消失
3.7 OPG可能通过影响mTORC1的亚基Raptor的磷酸化从而影响mTORC1的活性
3.8 细胞内OPG与raptor共表达的荧光图
3.9 OPG与Raptor蛋白相互结合
3.9 OPG与Raptor蛋白结合而影响其磷酸化
4 讨论
全文总结
参考文献
文献综述:mTORC1信号与机体各组织疾病关系研究
致谢
博士期间发表的论文
