不同培养条件对产毒铜绿微囊藻和不产毒铜绿微囊藻生长竞争的影响

摘要

铜绿微囊藻是水华时的优势藻种,铜绿微囊藻可分为产毒铜绿微囊藻和不产毒铜绿微囊藻,不同的环境条件可以影响这两种藻的竞争关系。本文对比并选择了一种最佳的铜绿微囊藻DNA提取方法并据此建立一套测定水中产毒和不产毒铜绿微囊藻浓度的实时荧光定量PCR方法,应用该方法检测混合培养液中两张藻量,通过PB设计和CCD设计考察了光照、温度、pH、硝态氮离子浓度、P离子浓度这五个因素对产毒/不产毒铜绿微囊藻生长竞争的综合影响。全文研究内容和实验结果如下:
　　 (1)分别对比了SDS裂解法、Dneasy Blood&Tissue Kit试剂盒、CTAB提取法提取铜绿微囊藻DNA的效果,结果表明采用Dneasy Blood& Tissue Kit试剂盒提取DNA具有很好的重复性,提取效率稳定;SDS裂解法也能有效提取铜绿微囊藻的DNA,但是重复性略差;CTAB法在提取样品DNA时发生了降解。
　　 (2)分别用SDS裂解法和Dneasy Blood& Tissue Kit试剂盒提取不产毒铜绿微囊藻标准品的DNA并建立标准曲线。结果表明采用Dneasy Blood& TissueKit试剂盒提取的标准品DNA具有很好的重复性,采用该方法提取的标准品DNA经PCR扩增后可以建立相关性很好的标准曲线用于产毒和不产毒铜绿微囊藻浓度的定量检测。
　　 (3)应用实时荧光定量PCR检测混合培养液中的产毒铜绿微囊藻和不产毒铜绿微囊藻的细胞浓度,通过PB设计在光照、温度、pH、硝态氮离子浓度、P离子浓度这五个因素中根据影响显著性分析筛选出光照、硝态氮离子浓度、温度这三个影响因子,然后采用中心组合实验设计法对这三个影响因子进行3因素5水平的组合实验设计,实验结果经RSM拟合,显示在混合培养初期,不产毒铜绿微囊藻很快能占据优势,而较强的光照强度和较高的硝态N离子浓度促进产毒铜绿微囊藻在混合培养中的竞争生长能力。