猪miR-135a-5p预测靶基因APC的鉴定

摘要

本研究旨在鉴定猪miR-135a-5p靶向脂肪发育的相关基因.首先,利用生物信息学软件分析发现,结肠腺瘤性息肉病(APC)基因的3’非翻译区(3' UTR)具有两个与猪miR-135a-5p结合的潜在位点.其次,构建APC基因野生型(APC 3'UTR)和突变型(APC 3'UTR m1、APC 3'UTR m2、APC 3'UTR m3)3' UTR双荧光素酶载体,并分别将其与miR-135a-5p mimics、阴性对照(NC)共转染PK-15细胞后检测荧光活性.结果显示:miR-135a-5p mimics显著降低APC 3 ' UTR和APC 3'UTR m2载体的荧光活性(P＜0.05),而APC 3'UTR m1和APC 3' UTR m3载体的荧光活性得到完全恢复,表明miR-135a-5p主要结合在预测的第一个位点.进一步的分析表明,miR-135a 5p抑制猪前体脂肪细胞内源APC基因的mRNA和蛋白质表达水平.研究结果证实,猪miR-135a-5p靶向APC基因,且调控其表达.本试验为深入研究猪miR-135a-5p的生物学功能及其调控脂肪形成的作用机制提供了基础.