SYBR Green I荧光 RT-PCR方法检测禽流感病毒

摘要

为建立检测禽流感病毒(AIV)的SYBR Green I荧光 RT-PCR方法,根据AIV的 M基因保守区的核苷酸序列设计引物.用4株不同亚型的AIV感染MDCK细胞,收集感染6、12、24、48、72 h的病毒.另外采取169份鸡的泄殖腔拭子和咽喉拭子.对上述样品的M基因进行检测,试图建立快速检测AIV的SYBR Green I荧光RT-PCR方法,并与普通RT-PCR方法和传统的病毒滴定方法进行比较.结果表明:此次建立的检测AIV的SYBR Green I荧光RT-PCR方法能检测到感染MDCK细胞后72 h的AIV,对169份泄殖腔拭子和咽喉拭子中的AIV检出率为5.33%(9/169),而普通RT-PCR方法检出率为6.51%(11/169),病毒滴定检出率为5.62(9/160).对其他病毒(NDV、IBDV、IBV、VA)则未检测到,且整个检测过程只需4 h,表明该方法特异、准确、快速.