DDR1对奶牛乳腺上皮细胞增殖与凋亡的调控作用

摘要

旨在通过干扰或过表达盘状蛋白结构域受体1 (DDR1)基因,探讨其对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡及周期的影响.本研究将DDR1基因小干扰RNA片段和过表达载体pcDNA3.1-DDR1转染奶牛乳腺上皮细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中DDR1的干扰和过表达效果;利用CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡(早凋、晚凋)的变化;利用qRT-PCR检测增殖与凋亡相关基因的表达情况.结果 ,在奶牛乳腺上皮细胞中干扰DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别下调94％和30％,而过表达DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别上调68.24和1.38倍;干扰DDR1极显著抑制细胞的增殖(P＜0.01),细胞早凋与晚凋比例极显著上升(P＜0.01);干扰组G1期细胞比例极显著上升(P＜0.01),S期细胞比例极显著下降(P＜0.01),G2期细胞比例显著下降(P＜0.05),提示细胞阻滞在G0/G1期.相反,过表达DDR1能显著促进细胞增殖(P＜0.05),显著抑制细胞晚期凋亡(P＜0.05),G1期细胞比例极显著下降(P＜0.01),S期细胞比例极显著上升(P＜0.01),促进细胞由G1期向S期的转换.qRT-PCR检测结果显示,干扰DDR1后显著上调BAX、Caspase9基因的表达(P＜0.05),极显著上调P53、FAS基因的表达(P＜0.01),且显著下调PCNA、CyclinB1基因的表达(P＜0.05);过表达DDR1后,分别显著和极显著下调Cytc与BAX基因的表达(P＜0.05,P＜0.01),并极显著上调CyclinB1基因的表达(P＜0.01).综上可见,DDR1能够调控奶牛乳腺上皮细胞的增殖、凋亡和周期,可为阐明DDR1参与奶牛乳腺上皮细胞生长发育的分子机制提供参考.