miR-495-3p对山羊卵巢颗粒细胞功能的影响

摘要

旨在探究miR-495-3p对山羊卵巢颗粒细胞功能的影响及作用机制。本研究选取健康的3~4月龄大足黑山羊母羊,收集卵巢颗粒细胞,利用miR-495-3p模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor)构建过表达和抑制模型,通过流式细胞术检测细胞凋亡和周期,ELISA分析颗粒细胞的雌二醇(E2)和孕酮(P4)分泌,采用qRT-RCR、Western blot检测细胞凋亡、增殖、周期及类固醇激素合成相关基因的mRNA和蛋白的表达水平。结果显示,miR-495-3p显著促进卵巢颗粒细胞凋亡(P<0.01),并且促进BAX表达(P<0.05),抑制BCL2表达(P<0.01);过表达miR-495-3p呈时间依赖性抑制细胞增殖活力,显著降低PCNA的表达(P<0.05);过表达miR-495-3p显著增加G2/M期细胞百分比(P<0.05),并显著降低细胞周期相关基因CDK4(P<0.001)和CCND1(P<0.05)的mRNA水平,抑制miR-495-3p极显著降低CCNE1的mRNA水平(P<0.01);miR-495-3p促进颗粒细胞E2和P4分泌;过表达miR-495-3p显著提高3β-HSD(P<0.001)、CYP11A1(P<0.01)、CYP19A1(P<0.05)的mRNA和蛋白表达水平,干扰miR-495-3p极显著抑制3β-HSD(P<0.01)、促进CYP11A1的表达(P<0.01)。上述结果表明,miR-495-3p促进颗粒细胞凋亡,抑制增殖,将细胞周期阻滞在G2/M期,刺激类固醇激素分泌,从而影响山羊卵泡的发育。