高效电融合法制备抗牛γ-干扰素单克隆抗体

摘要

目的 为了获得高特异性牛 γ-干扰素单克隆抗体。方法 采用工程菌 BL21（ DE3） /p ET28aHis-BoIFN-γ 表达的目的蛋白 BoIFN-γ 免疫小鼠，优化电融合条件，制备抗 BoIFN-γ 单克隆抗体，采用间接酶联免疫吸附法、蛋白质印迹法鉴定单克隆抗体特异性。结果 在裂解大肠杆菌液的上清液中目的蛋白 BoIFN-γ 高表达。脾脏淋巴结细胞与 SP2/0 细胞比例 3∶ 1，单次融合细胞数3 ×10~7个，交变电场电压 40 V，直流脉冲电压 500 V 时，细胞融合率可达 0. 41% 。而 PEG 法的细胞融合率为 0. 07 % 。获得 3 株抗 BoIFN-γ 单克隆抗体杂交瘤细胞株（ 2E9、3F7、5B7） ,2E9 和 5B7 的亚类为 IgG2a,3F7 亚类为 IgG2b。抗体最高效价为 1∶ 25600,3 株单抗均可识别标准 BoIFN-γ 蛋白，其中 3F7 亲和力最高。结论 说明细胞高效电融合法的细胞融合率显著高于 PEG 化学诱导法。电融合法制备的单克隆抗体效价高、特异性强、敏感度高。