环介导恒温扩增技术检测血卵涡鞭虫

摘要

血卵涡鞭虫病是海水甲壳类的重要寄生虫病,其流行范围广、死亡率高、危害非常严重.本研究根据GenBank中已登录的血卵涡鞭虫(Hematodinium sp.)ITS1序列设计了1套引物,该引物可识别目标基因中6个不同区段.以此套引物建立了一种基于环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的血卵涡鞭虫病诊断方法.特异性试验结果表明,该套引物对血卵涡粳虫检测具有较高的特异性,能有效检出血卵涡粳虫.敏感度试验结果表明,该LAMP技术的灵敏度比常规PCR技术高4个数量级.分别运用LAMP和常规PCR技术对25份临床疑似病例进行检测,LAMP方法共检出感染病例25份,常规PCR检出感染病例23份.该技术能在65℃恒温条件下45～60 min完成目的DNA的扩增,可直接通过肉眼观察反应产物中是否产生白色沉淀或经SYBR Green Ⅰ染色后通过颜色变化、扩增产物的琼脂糖凝胶电泳来定性判断结果,这将为血卵涡鞭虫病的临床诊断提供一种更加简便、快速、实用的方法.