IDENTIFICATION OF uvrA GENE MUTATION SITES IN TWO MITOMYCIN-SENSITIVE Deinococcus radiodurans STRAINS

摘要

抗辐射菌Ｄｅｉｎｏｃｏｃｕｓｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ具有显著的ＤＮＡ损伤修复能力，包括对丝裂霉素（ＭＣ），紫外线（ＵＶ）及电离辐射等所致的损伤。在用对ＤＮＡ损伤因子具有抗性的野生型抗辐射菌ＫＤ８３０１的基因组ＤＮＡ构建的基因文库中，有四个克隆能够通过其ＤＮＡ转化，使二株对ＭＣ敏感的Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ的突变体－２６２１和３０２１回复对ＭＣ的抗性。克隆了二株突变体中受突变（ｍｔｃＡ或ｍｔｃＢ）影响的基因，并测定了该基因的核苷酸序列。理论上推定抗辐射菌ｕｖｒＡ基因产物的氨基酸序列是由１０３６个氨基酸组成，与许多细菌的ＵｖｒＡ蛋白质具有同源性。用ＰＣＲ技术扩增二株突变体基因组中相应的ＤＮＡ片段，并对其加以测序分析，确定了突变发生的位点。对于突变体３０２１，其ｕｖｒＡ基因中发生了１４４个碱基对（ｂｐ）的缺失突变（缺失部分包括ｕｖｒＡ的起始密码），造成了３０２１的ｕｖｒＡ基因的失活。对于２６２１突变体，其ｕｖｒＡ基因内却发生了一个插入突变，造成了该基因的插入失活。该插入序列由１３２２ｂｐ组成，侧面与１９ｂｐ组成的末端反转重复（ＩｎｖｅｒｔｅｄＴｅｒｍｉｎａｌＲｅｐｅａｔｓ，ＩＴＲ）相连接，并产生?