利用报告基因表达系统快速鉴定骨诱导活性材料

摘要

通过构建真核表达质粒,使增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Pro-tein,EGFP)报告基因的表达受骨形成相关转录因子Cbfa1基因启动子的调控,再用该质粒转染大鼠成肌细胞L6,建立稳定细胞株.在成骨培养基中诱导培养后,该细胞株呈现较明显的绿色荧光,表明细胞在经诱导的成骨分化过程中,Cbfa1基因表达增强,Cbfa1启动子驱动了EGFP的表达.将该细胞株接种到有较强骨诱导活性的羟基磷灰石/磷酸三钙(hydroxyapa-tite-tricalcium phosphate,HA/TCP)陶瓷支架材料的表面,可观察到细胞中绿色荧光的增强;而接种到不具备骨诱导活性的胶原海绵(Collagen sponge)材料表面的细胞,未观察到绿色荧光的变化.细胞绿色荧光的增强与材料的骨诱导活性相一致,表明该细胞株可用来快速鉴定生物材料的骨诱导活性.