连接酶反应检测乙型肝炎病毒阿德福韦耐药突变的初步研究

摘要

目的 建立一种基于连接酶检测反应(LDR)技术的方法,检测慢性乙型肝炎患者阿德福韦(ADV)耐药突变rtA181v/T和rtN236T.方法 设计特异性引物和针对不同突变类型的探针,聚合酶链反应(PCR)扩增后进行LDR,最后在测序仪上分析结果.以直接测序法作为对照分析55例临床标本,对结果不一致的标本进行亚克隆测序确认.结果 LDR能够在野生型质粒背景下检测到1%的rtA181V/T或rtN236T突变质粒,不与野生型质粒及血清常见病毒产生交叉扩增.55例临床标本中检测到8例(14.5%)rtA181V/T和rtN236T双突变,6例(10.9%)rtA181V/T单突变,7例(12.7%)rtN236T单突变,与直接测序法结果一致的标本有52例(94.5%).对3例结果不一致的标本进行亚克隆测序分析,结果与LDR一致.结论LDR是一种特异、敏感的方法,可以用于监测慢性乙型肝炎患者ADV耐药突变.