肉牛MSTN基因miRNA干扰载体的构建及干扰效果验证

摘要

构建肉牛MSTN基因的miRNA特异性干扰载体,并在肉牛骨骼肌卫星细胞中验证其有效性。设计4对肉牛MSTN基因特异性miRNA寡聚单链DNA序列,分别克隆在pcDNA TM 6.2-GW/EmGFPmiR上,构建MSTN基因miRNA的干扰载体,转染肉牛骨骼肌卫星细胞,实时荧光定量PCR及Western blot分别用于检测MSTN基因mRNA及蛋白表达量,结果显示,成功构建了4个miRNA干扰载体miR-MSTN-1、miR-MSTN-2、miR-MSTN-3及miR-MSTN-4。4个载体均能有效下调MSTN mRNA及蛋白的表达,其中miR-MSTN-4的干扰效果最好。说明成功构建针对肉牛MSTN基因的miRNA特异性有效干扰载体,为通过MSTN基因的miRNA干扰生产高产肉性能肉牛的研究奠定了基础。