水飞蓟宾增强TRAIL对MDA-MB-231细胞的凋亡诱导活性研究

摘要

目的 探讨中药活性成分水飞蓟宾对增强TRAIL对三阴乳腺癌细胞的凋亡诱导的能力并研究其机制.方法 将三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231分为对照组、水飞蓟宾组、TRAIL组及水飞蓟宾联合TRAIL组,MTT法检测MDA-MB-231细胞的细胞活力,Annexin V/PI染色检测MDA-MB-231细胞的凋亡,免疫共沉淀联合Westernblot法检测MDA-MB-231细胞FADD-caspase-8死亡受体复合物的形成,Western blot法检测MDA-MB-231细胞caspase-8的活化和FADD的表达水平.结果 MTT实验结果表明TRAIL体外单独治疗仅能轻微抑制MDA-MB-231的细胞活力,联合水飞蓟宾后TRAIL对MDA-MB-231细胞活力的抑制率显著提升.流式细胞实验结果表明TRAIL体外单独治疗对MDA-MB-231的凋亡诱导活性较低,联合水飞蓟宾后TRAIL对MDA-MB-231的凋亡诱导活性显著提高.免疫共沉淀联合western blot实验结果表明水飞蓟宾在体外能显著上调MDA-MB-231细胞中FADD蛋白的表达水平而TRAIL不能影响其表达,同时水飞蓟宾还能显著促进TRAIL依赖的FADD-caspase-8复合物的形成和caspase-8的活化.转染FADD siRNA后,水飞蓟宾对TRAIL的协同作用丧失.结论 水飞蓟宾通过上调去泛素化酶FADD的表达水平促进TRAIL依赖的RIP1蛋白的去泛素化进而诱导三阴乳腺癌细胞caspase-8的活化和凋亡的发生.