人类α-actin 启动子真核表达载体的构建及应用

摘要

利用PCR技术克隆了人类α-actin基因的启动子(约450bp),尝试用去掉启动子的pEGFP-N1作为框架结构,成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-α-actin-P.应用Lipofectamine 2000将所构建的pEGFP-N1-α-actin-P转染入小鼠ES细胞.通过比较,发现在本实验室条件下,质粒DNA浓度以3.0～5.0 μg/mL,转染时间约在2～3 h最佳.200 μg/mL 的G418较适宜于靶细胞的转染与筛选.得到表达心肌α-actin和GFP的小鼠ES细胞,基本维持小鼠ES细胞的形态.PCNA染色结果表明,转染后的小鼠ES细胞具有增殖能力.α-actin抗体免疫组化染色结果表明,转染后细胞表达α-actin和GFP,揭示构建的真核表达载体pEGFP-N1-α-actin-P转染小鼠ES细胞,可能促进其向心肌细胞分化并对其筛选.