PCR-RFLP

摘要： ALDH2编码乙醛脱氢酶,是人体乙醇代谢途径的重要组分。人类ALDH2基因存在SNP (单核苷酸多态性)现象,其gDNA在37,030位发生单碱基替换后导致乙醛脱氢酶失活,且该突变基因在东亚人群中有较高频率。根据此单碱基的差别,本文采用PCR-RFLP方法,通过提取、纯化、酶切受试者口腔上皮细胞基因组DNA,实现了对于三种ALDH2基因型的鉴定,其创新点在于简化实验步骤、提升产物回收效率的同时使判断更加准确。结论:PCR-RFLP法鉴定人ALDH2基因型可作为分子遗传学实验教学的案例。

摘要： 马梨形虫病是一种由驽巴贝斯虫和马泰勒虫引起的蜱传血液寄生虫病,对我国养马业造成了巨大的经济损失。为了快速准确地鉴别驽巴贝斯虫和马泰勒虫,设计马梨形虫18S rRNA基因通用引物,运用PCR方法扩增序列,经过序列比对与分析,选用限制性内切酶DraⅠ对马梨形虫感染样本进行酶切。结果表明,马梨形虫两种病原18S rRNA基因PCR扩增产物长度为1500 bp。酶切后驽巴贝斯虫18S rRNA基因序列没有变化,马泰勒虫被切成大小为350 bp和1100 bp的两段,混合感染样本则形成350,1100 bp和1500 bp的3条带。实验建立的鉴别马梨形虫PCR-RFLP的方法实验流程简单,节约实验成本,可以快速并准确的鉴别马梨形虫的种类,为马梨形虫的分类提供了新的方法。

摘要： 母猪繁殖性状对养猪行业的生产效益和经济利益至关重要,近年来与母猪繁殖性状的候选基因及分子标记备受关注。本研究以170头宁乡猪为研究对象,选取转录因子23(Transcription factor 23,TCF23),采用PCR-RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism),并通过酶切和测序峰图结果确定各个体的基因型,统计分析各基因型的成活率、初生仔猪死亡数、总产仔数及产活仔数。研究结果表明,将宁乡猪TCF23基因第2个外显子PCR-SmaⅠ-RFLP和DNA测序对比发现TCF23基因G387A位点存在三种基因型:GG基因型,AG基因型和AA基因型,它们的基因型频率分别为0.824、0.13和0.045,等位基因频率G(0.89)大于A(0.11)。PIC=0.17,属于低度多态,He=0.195,遗传变异程度较低,Ne=1.243,表明TCF23基因G387A位点的基因型在宁乡猪群体中分布不均,χ;=17.78(PAG>GG基因型,其中AA基因型的总产仔数显著高于AG基因型和GG基因型(P0.05)。结果表明TCF23基因可望作为猪产子数的候选基因应用于猪选育。

摘要： 【目的】克隆获得猪β-防御素-124(porcine beta-defensin-124,PBD-124)基因CDS区并探究其多态性,分析PBD-124基因在不同品种猪及同种猪不同组织内的表达情况。【方法】采用RT-PCR方法扩增并克隆猪PBD-124基因CDS区,利用PCR-RFLP酶切法对大白猪、民猪和野杂猪PBD-124基因的BlnⅠ酶切位点进行多态性检测,利用实时荧光定量PCR方法检测该基因在不同品种猪肝脏、脾脏和血液内的表达差异。【结果】试验成功克隆出猪PBD-124基因CDS区,长423 bp,共编码140个氨基酸,测序结果发现其存在c.257 G>A和c.263 T>G 2个突变位点,因2个突变位点间隔过近,可能存在连锁,仅对第1个突变位点进行酶切,大白猪中检测到GG、GA、AA 3种基因型,而民猪和野杂猪中仅检测到GA和AA 2种基因型,3个群体中AA基因型均为优势基因型,大白猪、民猪和野杂猪的AA基因型频率分别为0.5261、0.9412和0.6452,且3个群体均处于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。3个群体的多态性均不高,大白猪处于中度多态(0.25

摘要： 为研究NR3C2基因与鸡繁殖性能的相关性,本试验采用PCR-RFLP方法检测了鸡盐皮质激素受体(NR3C2)基因在汶上芦花鸡、济宁百日鸡和莱芜黑鸡3个地方鸡种和1个引进高产蛋鸡品种海兰褐中的多态性,结果在4个群体中检测到NR3C2基因3714 nt处发生点突变G→A,基因型GG在3个地方鸡种中表现为劣势,而在高产蛋鸡海兰褐中表现为优势基因型,频率为88.84%,优势等位基因G频率为93.93%。该位点各基因型与392只莱芜黑鸡4个繁殖性状的关联分析结果表明3714位点与43W产蛋量(P=0.0467)、44W产蛋量(P=0.0486)和45W产蛋量(P=0.0499)均表现出显著相关,且GG基因型个体的开产日龄最早,比GA基因型个体平均早1.17 d。因此,GG基因型可以作为地方鸡种繁殖性状的分子标记,在地方鸡种遗传改良过程中加以利用。

摘要： Numerous studies are being carried out on polymorphisms within the genes coding for factors VIII and IX due to their clinical relevance in the context of hereditary disorders. The quests for polymorphism can be used to screen for haemophilia through an affected family. In Cameroon, very few studies on factors VIII and IX gene polymorphisms have been conducted. Thus, this study was aimed at detecting HindIII SNP of the F8 gene and MseI SNP of the F9 gene by the Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RLFP) method and determining their involvement in the severity and complications of haemophilia. Fifty-five consented haemophilia patients from the Centre Hospitalier et Universitaire de Yaoundé (CHUY) were recruited for this study on a convenience sampling basis. Finger-prick blood was collected and spotted on filter papers from which DNA was extracted and then subjected to the PCR-RFLP. We were able to recruit 55 (37.16%) patients out of the 148 haemophilia patients registered at the CHUY until December 2018. The average age was 15 years. Of the 55 haemophilia patients, 42 (76.36%) had type A haemophilia and 13 (23.64%) had type B haemophilia, 41 patients (74.55%) had a severe form, 10 (18.18%) had a moderate form and 4 (7.27%) a mild form). Of the 55 patients recruited, 38 (69.09%) already had an osteoarticular complication and the remaining 17 (30.91%) had no complication. Fifty-three (96.36%) participants had HindIII SNP and a significant association was found with the severity of hemophilia (P = 0.00). No association (P = 0.56) was found with osteoarticular complications of haemophilia. On the other hand, 15 (27.27%) participants were diagnosed with MseI SNPs and no association was found with the severity (P = 0.89) or complications (P = 0.68) of haemophilia.

摘要： Introduction: DNA repair enzymes continuously monitor DNA to correct damaged nucleotide residues generated by exposure to environmental mutagenic and cytotoxic compounds or carcinogens. Our objective was to investigate the association among XRCC1 (Arg399Gln and Arg194Trp), XRCC3 (Thr241Met), XPD-ERCC2 (Lys751Gln), APE1 (Asp241Glu), PARP-ADPRT (Val762Ala) DNA repair gene polymorphisms and lung cancer in Turkish population. Materials and Methods: Our patient group consists of 90 patients with lung cancer and the control group had 100 healthy individuals all of those smoking. DNA was extracted using the whole blood samples. PCR- RFLP technique was used to investigate the polymorphisms on target genes. Results: There was no significant difference in the genotype distributions of XPD Lys751Gln, XRCC1 Arg194Trp, XRCC3 Thr241Met, APE1 Asp241Glu between lung cancer patients and controls for each polymorphism (p > 0.05). However, there was a significant difference between the genotype distributions of XRCC1 Arg399Gln, and PARP Val762Ala in patients and the control group (p > 0.05). Discussion: Only the polymorphisms of XRCC1 codon 399 and PARP Val762Ala alleles are associated with the risk of lung cancer. Other genotypes were not related to lung cancer.

摘要： 目的:旨在对巴克夏猪、淮猪及其杂交F1代进行氧烷基固(HAL)多态性检测.方法:选用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对巴克夏猪、淮猪(霍寿黑猪)以及它们杂交F1代巴淮猪HAL基因Hha I酶切位点多态性进行检测.结果:3个猪群都只检测到HALNHALN、HALNHALn基因型,未检测到HALnHALn纯合基因型,均处于低度多态(PIC<0.25).巴淮猪HALNHALN基因型频率(0.9238)和HALNHALn基因型频率(0.0762)介于巴克夏猪HALNHALN(0.9687)、HALNHALn(0.0313)和淮猪HALNHALN(0.8947)、HALNHALn(0.1053)基因型频率之间,淮猪等位基因HALn频率(5.26％)高于巴淮猪HALn频率(3.81％)和巴克夏猪HALn频率(1.56％).结论:在巴克夏猪、淮猪及它们的F1代巴淮猪中均检测到了杂合子HALN HALn,且淮猪等位基因H A Ln频率较高,应加快对猪氟烷基因的筛选和净化.

摘要： 为分析VIPR-1基因是否能作为鹌鹑早期生长性状的相关分子标记或者候选基因,以中国黄羽鹌鹑、中国白羽鹌鹑、朝鲜鹌鹑3个蛋用鹌鹑品种作为实验对象,采用PCR-RFLP技术和测序技术检测VIPR-1基因的外显子6-7的多态性,并分析该基因多态性与蛋用鹌鹑早期生长性状的关联程度.结果表明,在3个蛋用鹌鹑品种中的VIPR-1基因外显子6-7区域共检测出15个SNP位点,分别为A94G、G97T、C201T、A204G、A233G、C260G、A299T、C354T、A355G、C378T、C407G、A425C、A543G、G585T、A586G.对HpyCH4IV位点(A355G)进行酶切分析,可以检测到3种基因型即AA(285 bp/811 bp)、AG(285 bp/811 bp/1096 bp)和GG(1096 bp).中国黄羽鹌鹑和中国白羽鹌鹑的AA、AG、GG基因型频率分别为0.227、0.636、0.136和0.087、0.609、0.304.朝鲜鹌鹑AG和GG基因型频率分别为0.235和0.765.1～4周龄时,VIPR-1基因的HpyCH4IV位点与中国黄羽鹌鹑的日增重、体重、胫长、胸宽、胸深、胸骨长、胫围有显著关联性(P<0.05).HpyCH4IV位点与中国白羽鹌鹑的胫围有显著关联性(P<0.05).HpyCH4IV位点与朝鲜鹌鹑的体重、胸宽、胸深有显著关联性(P<0.05).5～7周龄时,VIPR-1基因的HpyCH4IV位点与中国黄羽鹌鹑的体重、胸骨长、胫长、体长、胸宽、胸深、胫围、日增重和相对生长率均有显著的关联性(P<0.05).HpyCH4IV位点与中国白羽鹌鹑的日增重和相对生长均有显著的关联性(P<0.05).HpyCH4IV位点与朝鲜鹌鹑的体重有显著的关联性(P<0.05).综上研究表明,VIPR-1基因外显子6-7的HpyCH4IV位点(A355G)对蛋用鹌鹑的早期生长性状具有一定影响.

摘要： 实验旨在对边鸡新品系6个世代的生长性能进行测定,并在第5世代进行PCR-RFLP分析,检验双向选择效果.结果显示:各世代从初生到16周龄,快长系(AA)公鸡的体重均极显著高于慢长系(GG)公鸡,AA母鸡的体重均极显著高于GG母鸡.AA公鸡16周龄由1世代1600.37 g增加到6世代2107.62 g,提高了31.70％,AA母鸡16周龄由1205.18 g增加到1592.49 g,提高了32.14％;GG公鸡16周龄体重由1世代的1429.30 g降低到6世代的1078.13 g,减少了24.57％,GG母鸡16周龄体重由1056.03 g降低到814.12 g,减少了22.91％.AA公母鸡的生长曲线呈上升趋势,GG公母鸡的生长曲线呈下降趋势.快长系个体和慢长系个体的基因型纯合率为100％.结果表明,以分子标记辅助育种为基础的边鸡新品系双向选择效果明显.

摘要： 本试验所用7个国外引进高产商品蛋鸡品种，包括:海兰褐、海兰白、罗曼褐、岁曼粉、海塞克斯、伊莎褐、尼克珊瑚，均为商品代。采血、提取DNA后采用PCR-RFLP方法进行基因分型，本试验旨在检测FMO3基因A649T突变在国内各引进高产商品蛋鸡品种中的分布，以便进一步在这些品种的纯系中进行剔除。

摘要： 本试验所用7个国外引进高产商品蛋鸡品种，包括:海兰褐、海兰白、罗曼褐、岁曼粉、海塞克斯、伊莎褐、尼克珊瑚，均为商品代。采血、提取DNA后采用PCR-RFLP方法进行基因分型，本试验旨在检测FMO3基因A649T突变在国内各引进高产商品蛋鸡品种中的分布，以便进一步在这些品种的纯系中进行剔除。

摘要： 本试验所用7个国外引进高产商品蛋鸡品种，包括:海兰褐、海兰白、罗曼褐、岁曼粉、海塞克斯、伊莎褐、尼克珊瑚，均为商品代。采血、提取DNA后采用PCR-RFLP方法进行基因分型，本试验旨在检测FMO3基因A649T突变在国内各引进高产商品蛋鸡品种中的分布，以便进一步在这些品种的纯系中进行剔除。

摘要： 在养猪生产中，胚胎附植时期的胚胎死亡占全部胚胎死亡的60％以上，因此此过程能否顺利进行对猪产仔数起着很大的影响。白细胞介素6(IL-6)是由活化的单核T淋巴细胞、巨噬细胞、成纤维细胞和某些肿瘤细胞分泌的一种重要的细胞因子。现有研究表明，IL-6可参与调节其他血管生成因子及某些重要酶的合成，为胚胎附植、绒毛发育及胎盘形成提供适宜的条件，而且IL-6的表达在胚泡植入期最高，提示它可能与胚胎附植有关。

摘要： 在养猪生产中，胚胎附植时期的胚胎死亡占全部胚胎死亡的60％以上，因此此过程能否顺利进行对猪产仔数起着很大的影响。白细胞介素6(IL-6)是由活化的单核T淋巴细胞、巨噬细胞、成纤维细胞和某些肿瘤细胞分泌的一种重要的细胞因子。现有研究表明，IL-6可参与调节其他血管生成因子及某些重要酶的合成，为胚胎附植、绒毛发育及胎盘形成提供适宜的条件，而且IL-6的表达在胚泡植入期最高，提示它可能与胚胎附植有关。

摘要： 在养猪生产中，胚胎附植时期的胚胎死亡占全部胚胎死亡的60％以上，因此此过程能否顺利进行对猪产仔数起着很大的影响。白细胞介素6(IL-6)是由活化的单核T淋巴细胞、巨噬细胞、成纤维细胞和某些肿瘤细胞分泌的一种重要的细胞因子。现有研究表明，IL-6可参与调节其他血管生成因子及某些重要酶的合成，为胚胎附植、绒毛发育及胎盘形成提供适宜的条件，而且IL-6的表达在胚泡植入期最高，提示它可能与胚胎附植有关。

摘要： 在养猪生产中，胚胎附植时期的胚胎死亡占全部胚胎死亡的60％以上，因此此过程能否顺利进行对猪产仔数起着很大的影响。白细胞介素6(IL-6)是由活化的单核T淋巴细胞、巨噬细胞、成纤维细胞和某些肿瘤细胞分泌的一种重要的细胞因子。现有研究表明，IL-6可参与调节其他血管生成因子及某些重要酶的合成，为胚胎附植、绒毛发育及胎盘形成提供适宜的条件，而且IL-6的表达在胚泡植入期最高，提示它可能与胚胎附植有关。

摘要： MHC是基因组中多态性最丰富的基因之一，编码细胞表面糖蛋白。主要参与机体的免疫应答调控、抗原识别及诱导免疫反应，在脊椎动物的免疫系统中起着十分关键的作用。BoLA-DRB是牛MHC基因家族中的Ⅱ类基因，编码的MHC抗原与免疫应答和抗病性密切相关。牦牛(Bosgrunniens)是生活在青藏高原的特有牛种，能很好的适应当地高寒高海拔的恶劣环境。提供肉、乳、皮、毛等产品，是当地重要生产资料和生活资料，国内研究已证实牦牛对疾病有较高的抗性，但对该基因的研究报道较少。

摘要： MHC是基因组中多态性最丰富的基因之一，编码细胞表面糖蛋白。主要参与机体的免疫应答调控、抗原识别及诱导免疫反应，在脊椎动物的免疫系统中起着十分关键的作用。BoLA-DRB是牛MHC基因家族中的Ⅱ类基因，编码的MHC抗原与免疫应答和抗病性密切相关。牦牛(Bosgrunniens)是生活在青藏高原的特有牛种，能很好的适应当地高寒高海拔的恶劣环境。提供肉、乳、皮、毛等产品，是当地重要生产资料和生活资料，国内研究已证实牦牛对疾病有较高的抗性，但对该基因的研究报道较少。

摘要： MHC是基因组中多态性最丰富的基因之一，编码细胞表面糖蛋白。主要参与机体的免疫应答调控、抗原识别及诱导免疫反应，在脊椎动物的免疫系统中起着十分关键的作用。BoLA-DRB是牛MHC基因家族中的Ⅱ类基因，编码的MHC抗原与免疫应答和抗病性密切相关。牦牛(Bosgrunniens)是生活在青藏高原的特有牛种，能很好的适应当地高寒高海拔的恶劣环境。提供肉、乳、皮、毛等产品，是当地重要生产资料和生活资料，国内研究已证实牦牛对疾病有较高的抗性，但对该基因的研究报道较少。