氨基酰化酶

摘要： 利用硫酸铵分级盐析法从米曲霉L-09中提取氨基酰化酶,比活力为56.01 U/mg,纯化倍数为2.06,酶活力回收率为80％.详细研究该粗酶的酶学性质.结果表明,经盐析法提纯的粗酶最适pH为7,最适反应温度为55°C,在55°C下热稳定性良好.溶液中的金属离子对酶活力有很大影响.其中,高浓度的Fe2+、Mn2+和 Ca2+对酶活力有抑制作用,低浓度的Co2+离子对酶活力有激活作用.

摘要： A novel and practical approach for preparation of L-allothreonine and D-allothreonine was designed. The optical purity L-allo-Thr( or D-allo-Thr) compound was obtained by using the L-( or D-) aminoacylase to resolute the α-C racemic threonine of N-acetylation. The resolution conditions were optimized by assessing pH,temperature and the amount of Co2+ for obtaining the maxi-mum yield. The optimal condition was that pH was 7. 5,reaction temperature was 37°C,and concentration of Co2+was 0. 1 g·L-1 . The yield was 93. 8%for L-allo-Thr,89. 8%for D-allo-Thr,and de>99%. This method showed some advantages,such as high ste-reoselectivity,simple operation and mild conditions.%设计了一种新颖实用的制备L-别苏氨酸和D-别苏氨酸的方法。以α-C消旋的N-乙酰化苏氨酸为原料,用L-(或D-)氨基酰化酶拆分相应的底物得到了高光学纯度的L-别苏氨酸(或D-别苏氨酸)。为了获得较高收率,考查pH,温度,Co2+浓度对拆分反应的影响。确定最优条件为：pH 7．5,温度37°C,Co2+浓度0．1 g· L-1。反应产率达到93．8%( L-allo-Thr)、89．8%( D-allo-Thr),de>99%。该方法具有立体选择性高,操作简单,反应条件温和的优点。

摘要： 手性氨基酸是一类重要的有机化合物,其在制药、农业化学等领域有着广泛的应用.由化学合成法为起始,综述了生物法在手性氨基酸生产中的应用,重点介绍了化学-生物酶法在制备手性氨基酸中的应用.

摘要： 采用酶交联聚集体技术(CLEAs)制备氨基酰化酶(EC 3.5.1.14)交联聚集体,优化了制备条件.90％(体积比)乙醇为沉淀剂,戊二醛和乙二醇二缩水甘油醚(EGDE)作为混合交联剂,以酶、戊二醛和EGDE的质量比为1.00∶0.75∶2.00,在30°C下交联12h.制备所得氨基酰化酶CLEA酶活保留率为63.42％.氨基酰化酶经固定化后热稳定性得到增强,热失活过程由自由酶的一阶指数失活模型变为二阶指数失活模型,分子间亚基的结合力得到显著加强.自由酶在37°C下保存24 h后几乎损失了所有活力,而氨基酰化酶CLEA则保留了43％的酶活力,在57°C下保存24 h后仍有32％的酶活力保留.此外,氨基酰化酶CLEA重复使用性能得到明显提升,在重复水解底物10次后仍保留了72％的酶活力.

摘要： 目的：采用酶拆分法合成L-2,6-二甲基苯丙氨酸和L-2,4,6-三甲基苯丙氨酸。方法：通过乙酰氨基丙二酸二乙酯氨基酸合成法合成外消旋N-乙酰-2,6-二甲基苯丙氨酸和N-乙酰-2,4,6-三甲基苯丙氨酸,再以L-氨基酰化酶拆分,制备L-2,6-二甲基苯丙氨酸和L-2,4,6-三甲基苯丙氨酸。结果：以乙酰氨基丙二酸二乙酯为起始原料,分别以87.9%和86.0%的收率合成了外消旋的2,6-二甲基苯丙氨酸和2,4,6-三甲基苯丙氨酸。氨基酰化酶能拆分DL-N-乙酰-2,6-二甲基苯丙氨酸得到L-2,6-二甲基苯丙氨酸,但对N-乙酰-2,4,6-三甲基苯丙氨酸没有水解活性。结论：L-氨基酰化酶能用于2,6-二甲基苯丙氨酸的拆分,不能用于2,4,6-三甲基苯丙氨酸的拆分。

摘要： 以DL-异亮氨酸为原料经过乙酰化、氨基酰化酶拆分和水解制备D-异亮氨酸。使乙酸酐与DL-异亮氨酸在0～10°C下反应生成乙酰-DL-异亮氨酸,在氨基酰化酶的作用下,温度为37°C搅拌反应3d处理得到L-异亮氨酸和乙酰-D-异亮氨酸,乙酰-D-异亮氨酸经过盐酸水解得到D-异亮氨酸,收率为97.4%,光学纯度达到98%以上。另外,我们考察了酶拆分的时间和温度对拆分收率的影响。

摘要： 以树枝状大分子修饰的硅胶为载体,戊二醛为交联剂,对氨基酰化酶进行固定化研究。考察了树枝状大分子的代数、戊二醛浓度、反应温度与时间对氨基酰化酶固定化效果的影响,并且考察了该固定化酶的最佳酶解条件。结果表明,随着树枝状大分子代数的增加,固定化的酶量随之增大,同时,固定后的酶仍然保持较高的活性。

摘要： 选用稀土硝酸镧和紫外线对米曲霉CICC-2339进行联合诱变,通过三角瓶发酵法筛选得到氨基酰化酶高产菌株SUVLa,其酶活提高率为35.13%.经遗传稳定性试验验证,遗传特性稳定.

摘要： 利用氨基酰化酶固定化细胞酶法拆分了N-乙酰-,L-3-甲氧基丙氨酸. 考察了温度、pH值、底物浓度、金属离子和拆分时间对酶促反应的影响. 确定了氨基酰化酶固定化细胞手性拆分N-乙酰-,L-3-甲氧基丙氨酸的最佳工艺条件为pH=7.0、反应温度50 °C及底物浓度500 mmol/L. 10-4 mol/L的Co2+和Mg2+对氨基酰化酶有显著激活作用,Cu2+和Zn2+对酶促反应有明显抑制作用. 在最佳条件下,氨基酰化酶固定化细胞对N-乙酰-L-3-甲氧基丙氨酸的摩尔转化率达96%.

摘要： 比较了盐析法和有机溶剂沉淀法对于米曲霉氨基酰化酶的纯化效果.分别使用硫酸铵、无水乙醇和丙酮对米曲霉氨基酰化酶进行纯化,结果发现,有机溶剂沉淀法的纯化效果优于盐析法.采用丙酮二次沉淀法纯化的氨基酰化酶比酶活为93.20U/mg,纯化倍数为3.26;通过乙醇二次沉淀,得到的酶液比酶活为93.22U/mg,纯化倍数为3.10,而采用盐析法纯化的酶液的比酶活为56.01U/mg,纯化倍数为2.06.从酶的纯化效果方面考虑,丙酮沉淀法最佳,但从工业生产的可行性方面考虑,乙醇沉淀法较好。

摘要： 本文利用硫酸铵分级与有机溶剂结合的方法从米曲霉中提取米曲氨基酰化酶,并将其固定在改性海藻酸钙的载体上,用于拆分D,L-色氨酸,并对该酶及固定化酶的酶学性质进行了研究。

摘要： 研究了用明胶—戊二醛固定的米曲霉菌球的氨基酰化酶的基本性质和反应动力学.固定的米曲霉菌球的氨基酰化酶的最佳的反应条件为pH=8,T=60°C.菌体固定化后pH稳定性的热稳定性更强.当底物浓度小于0.2mol/L,没有底物抑制现象,此时拆分反应速率符合Michaelis-Menten方程.

摘要： 本文尝试用N-乙酰-苯丙氨酸酯类衍生物为底物,以氨基酰化酶为催化剂进行L-苯丙氨酸的制备,以期获得L-苯丙氨酸高效的制备方法.实验还考察了酶促反应的动力学.

摘要： 对固定化载体进行了筛选，研究发现功能基为DEAE（二乙基氨基乙基）大孔树脂GMAⅢ（聚甲基丙烯酸环氧丙酯）固定化效果较好，具体分析了固定化酶的性质，并对酶促反应进行初步研究。考察了反应温度、pH 值、金属离子浓度、底物浓度、产物浓度等因素对反应的影响。结果表明，低底物浓度下符合M-M方程，底物浓度400mmol/L，出现底物抑制，产物L-蛋氨酸不产生抑制。用固定化酶柱对乙酰-DL-蛋氨酸进行连续拆分，酶柱使用周期长，稳定性高。选用强酸型阳离子交换柱实现了拆分液的分离，不仅可以获得L-Met，且兼得N-Ac-D-Met，二者的收率在小试中分别达到85％以上和75％左右，解决了酶法生产L-Met后期产物分离效率较低的问题。

摘要： 目的:研究利用基因重组工程技术构建高活性的氨基酰化酶工程菌连续拆分D,L-蛋氨酸.方法:氨基酰化酶工程菌经发酵收集高活性的菌体,通过海藻酸钠包埋技术制备固定化酶,连续拆分D,L-蛋氨酸.结果:利用基因工程构建的工程菌表达氨基酰化酶,比酶活性大于6000μ/g湿菌体,酶柱比酶活性大于4000μ/g酶,半衰期20天,可连续拆分24天,拆分率达90％,收率达74.5％左右.结论:利用基因工程技术构建工程菌表达的氨基酰化酶活性高和拆分率高.

摘要： 研究了米曲霉菌液相培养的工艺条件，用正交设计优选出适宜的固定化条件，考察了各种因素对固定化细胞酶活力的影响，当底物成浓度小于0.2mol/L时拆分反应符合M-M方程。用固定化细胞柱进行连续拆分，表明该固定化细胞具有良好的工业应用前景。

摘要： 研究了米曲霉菌液相培养的工艺条件，用正交设计优选出适宜的固定化条件，考察了各种因素对固定化细胞酶活力的影响，当底物成浓度小于0.2mol/L时拆分反应符合M-M方程。用固定化细胞柱进行连续拆分，表明该固定化细胞具有良好的工业应用前景。

摘要： 研究了米曲霉菌液相培养的工艺条件，用正交设计优选出适宜的固定化条件，考察了各种因素对固定化细胞酶活力的影响，当底物成浓度小于0.2mol/L时拆分反应符合M-M方程。用固定化细胞柱进行连续拆分，表明该固定化细胞具有良好的工业应用前景。

摘要： 研究了米曲霉菌液相培养的工艺条件，用正交设计优选出适宜的固定化条件，考察了各种因素对固定化细胞酶活力的影响，当底物成浓度小于0.2mol/L时拆分反应符合M-M方程。用固定化细胞柱进行连续拆分，表明该固定化细胞具有良好的工业应用前景。

摘要： 本发明公开了一种具有戊二酰基-7-氨基头孢烷酸酰化酶和D-氨基酸氧化酶活性的双功能重组酶，该重组酶的基因序列与SEQ ID NO.2限定的基因序列具有90%以上同源性，且编码相同功能的蛋白质；重组酶编码基因的表达载体基因序列与SEQ ID NO.1具有90%以上同源性，且编码相同功能蛋白质的基因序列。在生产7-ADCA的过程中，使酶催化剂的表达生产、分离纯化以及去乙酰氧基头孢菌素C的催化水解工艺都得到简化。

摘要： 一种固定化氨基酰化水解酶拆分外消旋氨基酸生产左旋氨基酸的方法。该方法先将自由状态的氨基酰化水解酶经弱酸性阴离子交换树脂固定后,制成固定化酶柱,另将外消旋氨基酸用醋酐N－乙酰化后制成D,L－N－乙酰基氨基酸,并配制成5～15%(w/w)水溶液,在42～45°C,以0.01～0.05mL/min·g载体的流速匀速通过固定化酶柱,进行酶法拆分。拆分液经真空浓缩,冷却结晶,分离得左旋氨基酸和D－N－乙酰基氨基酸。D－N－乙酰基氨基酸经冰乙酸外消旋后,制成D,L－N－乙酰基氨基酸,按拆分参数通过固定化酶柱,进行拆分。如此循环,制得左旋氨基酸。

摘要： 本发明提供了一种新型的D－酰化氨基酸水解酶，它是对由甲基杆菌嗜中温菌属(Methylobacteriummesophilicum)MT10894等得到的新型D－酰化氨基酸水解酶的编码DNA进行克隆得到的，它对在工业有效基质浓度下有效进行由N－酰基－DL－氨基酸制备D－氨基酸的反应具有足够高的活性；本发明还提供了一种编码D－酰化氨基酸水解酶的DNA，以及使用含有这种DNA的转化体来由相应的N－酰基氨基酸制备D－氨基酸的一种方法。

摘要： 本发明涉及具有L-氨基酸-N-酰基转移酶酶活性的分离的多肽和过表达所述酶的经修饰的微生物。所述酶的底物主要包括甲硫氨酸及其衍生物或类似物。产生含硫氨基酸的微生物中的过表达允许产生大量N-酰化的含硫氨基酸。还涉及从发酵培养基分离N-酰化的含硫氨基酸。

摘要： 具有化学式(I)的化合物其中取代基是如权利要求1中所定义的，及其农用化学上可接受的盐，可以用作杀虫剂。

摘要： 本发明涉及利用大肠杆菌基因工程菌(保藏号CGMCC.No.0368)的氨基酰化酶进行酶解反应，生成L-蛋氨酸的生产工艺。本发明还涉及该大肠杆菌氨基酰化酶菌株及其制备方法，及来源于该大肠杆菌基因工程菌的氨基酰化酶。本发明的L-蛋氨酸的生产工艺，其包括以N-乙酰-D，L-蛋氨酸为原料，该氨基酰化酶、培养菌体或该菌体处理物作为酶源，进行酶解反应步骤生成L-蛋氨酸。采用该方法制造的L-蛋氨酸可用作医药品及化妆品的组成原料，以及广泛作为食品和饲料中的重要添加物等。

摘要： 纳滤膜在利用酰基转移酶或D-氨基酰化酶拆分D，L-氨基酸的应用，所述的纳滤膜的应用为经过酰基转移酶或D-氨基转移酶对N-乙酰-D，L-氨基酸进行裂解后的拆分液在超滤分离酶和其它大分子物质后，再采用纳滤膜过滤将手性氨基酸和N-乙酰氨基酸分离。

摘要： 本发明涉及利用大肠杆菌基因工程菌(保藏号CGMCC.No.0368)的氨基酰化酶进行酶解反应，生成L－蛋氨酸的生产工艺。本发明还涉及该大肠杆菌氨基酰化酶菌株及其制备方法，及来源于该大肠杆菌基因工程菌的氨基酰化酶。本发明的L－蛋氨酸的生产工艺，其包括以N－乙酰－D，L－蛋氨酸为原料，该氨基酰化酶、培养菌体或该菌体处理物作为酶源，进行酶解反应步骤生成L－蛋氨酸。采用该方法制造的L－蛋氨酸可用作医药品及化妆品的组成原料，以及广泛作为食品和饲料中的重要添加物等。

摘要： 纳滤膜在利用酰基转移酶或D-氨基酰化酶拆分D，L-氨基酸的应用，所述的纳滤膜的应用为经过酰基转移酶或D-氨基转移酶对N-乙酰-D，L-氨基酸进行裂解后的拆分液在超滤分离酶和其它大分子物质后，再采用纳滤膜过滤将手性氨基酸和N-乙酰氨基酸分离。

摘要： 本发明公开了一种米曲霉菌固定化制备氨基酰化酶的方法及拆分混旋氨基酸的装置。属于酶活制备光活性氨基酸技术,所述的固定化方法是以米曲霉菌为酶源,经在黄豆汁或土豆汁为主的培养液中培养并在明胶—乙二胺—戊二醛三元体系固定液中进行固定化制备而成。其制备工艺路线短,酶活保留率可达50—80%。所述的拆分装置,采用了酶反应器进出口处串联耦合超滤膜分离反应器,该装置不但具有拆分效率高,而且还具有操作简单、生产周期长等特点。