摘要：目的：采用最佳制备工艺构建RGD与R8肽共修饰麦角甾醇联合顺铂靶向脂质体递药系统并进行质量评价研究.rn 方法：第一步,建立麦角甾醇与顺铂含量测定方法学;第二步,通过薄膜分散法以麦角甾醇包封率为指标,对卵磷脂与麦角甾醇比例(摩尔比)、探头超声时间、麦角甾醇载药量进行单因素及响应面设计试验,确定最佳麦角甾醇脂质体制备工艺;第三步,确定氯化铵梯度法为顺铂主动载药方法后,以电导率测定方法判断透析终点即Ph主动载药梯度的形成并进行方法学考察,以顺铂包封率为指标,进行麦角甾醇与顺铂浓度比、孵育时间、孵育温度单因素及正交试验设计,从而确定麦角甾醇与顺铂脂质体最佳工艺;并对其形态、包封率及载药量、粒径及其分布、Zeta电位、Ph值、释放度进行质量评价研究;第四步,通过化学合成方法对RGD环肽与R8肽进行修饰,采用半制备液相进行纯化,通过MADLI-TOF-MS及H-NMR进行表征,获得DSPE-PEG3400-c(RGDfk)与DSPE-PEG1000-R8,采用MTT法考察其细胞毒性;第五步,通过后插入法制备RGD环肽与R8肽共修饰麦角甾醇联合顺铂主动载药脂质体递药系统;第六步,将RGD环肽与R8肽修饰、单一RGD环肽修饰、单一R8肽修饰、不修饰麦角甾醇联合顺铂脂质体与胎牛血清按1：1的比例(v：v)混合后在不同时间点下测定其血清稳定性;第七步,流式细胞术测定各脂质体的细胞摄取率,激光共聚焦显微镜定性观察A549细胞对各脂质体的摄取情况及A549肿瘤球的穿透能力;第八步,MTT试验测定各脂质体对A549细胞的增殖抑制率.rn 结果：最佳制备工艺结果显示：麦角甾醇脂质体最佳制备工艺为卵磷脂与胆固醇摩尔比5：1,探头超声20min,麦角甾醇载药10％.顺铂脂质体最佳工艺为顺铂浓度为0.150mg·Ml-1,孵育温度50℃,孵育时间10min.通过高效液相色谱对于修饰后多肽的液相条件的摸索及半制备液相对其进行纯化,将纯化后的样品进行MALDI-TOF-MS分析,鉴定出DSPE-PEG1000-R8及DSPE-PEG3400-c(RGDfk)多肽的分子量分别为3015.6及4751.8.按照SPC、Chole、DSPE-PEG1000-R8、DSPE-PEG3400-c(RGDfk)摩尔比5：1：0.07：0.07制备RGD与R8修饰脂质体.脂质体的质量评价研究结果表明,各脂质体形态较圆整,具有双层结构,粒径分布均匀.无修饰脂质体的平均粒径为153.4nm,多分散系数PDI为0.156,小于0.3,Zeta电位为-10.9Mv;RGD修饰脂质体的平均粒径为156.7nm,PDI为0.164,小于0.3,Zeta电位为-1.29Mv;R8修饰脂质体的平均粒径为154.3nm,PDI为0.178,小于0.3,Zeta电位为0.661Mv;RGD与R8共修饰脂质体的平均粒径为155.2nm,PDI为0.102,小于0.3,Zeta电位为4.74Mv,可见各脂质体的粒径分布较集中.第二步制备的麦角甾醇脂质体中麦角甾醇载药量为10％,包封率为90.49％;第三步顺铂脂质体中顺铂载药量为2.44％,包封率为52.24％,Ph值为6.64,过氧化值0.1095,24h的累积释放率超过80％.各脂质体在血清中均稳定.各脂质体在体外均有明显的A549肺癌细胞增殖抑制作用,且RGD与R8共修饰及R8修饰脂质体抑制作用最强,RGD次之,不修饰脂质体再次.A549细胞在给药4h时对各脂质体的摄取率最高,共修饰脂质体在各个浓度下的摄取率均最高,并且呈现浓度依赖关系,实验结果表明A549细胞对脂质体的摄取主要通过网格蛋白介导的内吞途径(氯丙嗪).rn 结论：本实验成功构建了质量稳定的RGD环肽与R8共修饰麦角甾醇联合顺铂靶向脂质体递药系统,进一步提高了体外抗肺癌作用及肿瘤细胞靶向性.
