HBV复制

摘要： 目的探讨C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)基因对肝癌HepG2.215细胞株乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法用CRP基因过表达载体、CRP基因沉默载体、CRP基因突变载体及CRP基因空载体的慢病毒转染并筛选HepG2.215细胞稳定株进行研究。分为实验组、阴性对照组和空白对照组。采用RT-qPCR检测各组CRPmRNA表达水平,Western blot检测CRP蛋白表达水平,定量PCR检测HBVcccDNA、HBVDNA表达水平,免疫荧光检测乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)表达情况,透射电镜检查观察HepG2.215细胞病毒复制情况,采用ELISA检测培养上清中HBsAg、HBeAg的表达水平,采用RT-qPCR检测HBVmRNA、HBVpgRNA的表达。结果CRP在HepG2.215细胞中的表达高于HepG2细胞(P<0.05)。CRP基因过表达组与阴性对照组相比较,HepG2.215细胞CRP蛋白和CRPmRNA、HBVcccDNA、HBVpgRNA及HBcAg表达升高,沉默CRP基因上述各项指标表达水平下降(P均<0.05);CRP基因过表达组与空白对照组相比较,HepG2.215细胞HBVmRNA、HBVDNA、HBsAg、HBeAg表达水平升高;CRP基因沉默组与空白对照组相比较,上述各项指标表达均降低(P均<0.05);CRP基因突变表达组与空白对照组相比较,HepG2.215细胞HBsAg表达水平升高(P<0.05)。结论CRP可促进肝癌HepG2.215细胞HBV的复制,并促进HBV相关抗原HBsAg、HBeAg、HBcAg的表达。CRP突变对HBsAg表达有一定促进作用。

摘要： 乙肝肝硬化是临床常见的肝脏疾病,主要由乙肝病毒(HBV)长期感染,肝脏发生慢性持续性炎症过程中,损伤的肝细胞反复自我修复引起纤维沉积所致[1]。在机体受HBV感染后,疾病的进展呈“慢性乙型肝炎-肝纤维化-乙肝肝硬化”过程变化[2]。造成乙肝患者肝硬化的重要因素是HBV在肝脏内的持续复制,虽然目前有多种抑制HBV复制的药物,在疾病的控制、延缓病程进展等方面都具有积极的作用,但是仍然没有能够完全清除HBV的药物[3]。肝硬化在病理组织学上表现为广泛的肝细胞坏死、剩余存活的肝细胞呈结节性再生、结缔组织增生、纤维隔形成,肝小叶结构破坏,假小叶形成,造成肝脏慢性变形、变硬,最终发展为肝硬化[4]。

摘要： 乙型肝炎病毒(HBV)感染目前还无法完全彻底清除病毒。强效、安全的核苷(酸)类似物(NUC)长期治疗可显著抑制病毒复制,减少肝硬化及相关并发症和肝细胞癌(HCC)的发生,但NUC不能完全清除HBV复制模板肝细胞内共价闭合环状DNA(cccDNA),难以获得HBsAg清除,HBsAg年转阴率仅为0.15%-0.33%。随意停用NUC可导致病毒学复发和转氨酶升高,继而增加了肝功能失代偿.

摘要： 慢性乙型肝炎(以下简称“慢乙肝”)与肝硬化、肝癌密切相关,众多研究表明疾病是否进展与高病毒载量密切相关,而积极抗病毒治疗的目的就是长期最大限度地抑制HBV复制,减轻肝细胞炎性坏死及肝纤维化,延缓和减少肝功能衰竭、肝硬化失代偿、肝细胞癌(HCC)及其他并发症的发生,从而改善患者的生活质量和延长生存时间。除了如何开始治疗和如何安全停药外,在治疗过程中的监测和管理也同样重要。下面,笔者和大家谈谈慢乙肝治疗过程中的管理问题。

摘要： 【据《Clin Gastroenterol Hepatol》2019年7月报道】题:HBV DNA和RNA检测双阴性可预测核苷(酸)类药物停药后的持续应答(作者Fan R等)长期核苷(酸)类药物治疗可显著抑制HBV复制、逆转肝纤维化并降低肝癌发生风险,但仍无法彻底清除肝细胞核内的共价闭合环状DNA(cccDNA),从而导致大部分患者需要长期甚至终身服药。该项研究旨在评估停药时实现HBV DNA和RNA双阴性的CHB患者是否可实现长期应答。

摘要： 【据《Hepatology》2019年3月报道】题:泛素结合酶UBE2L3功能位点维持cccDNA稳定性并促进HBV复制的机制研究(作者ZhouL等)尽管以往研究通过全基因关联分析(GWAS)发现多个HBV易感性基因,但是缺乏对这些基因或位点的生物学意义和临床价值的深入研究,并多集中于成人乙型肝炎队列研究。重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室Zhou等建立了上千人的HBV高危暴露儿童队列和HBV慢性感染儿童的病例样本库;并在儿童队列中鉴定了一批重要的HBV易感基因。首次揭示泛素结合酶基因UBE2L3单核苷酸多态性(SNP)位点与儿童HBV慢性感染和干扰素治疗效果具有显著性关联;研究发现位于UBE2L3启动子区的SNP rs59391722的GG基因型显著增加UBE2L3表达;而UBE2L3的高表达可显著增加肝细胞中HBV cccDNA和RNA的水平。

摘要： 【据《J Viral Hepat》2018年3月报道】题：α-烯醇化酶（EN01）通过抑制干扰素信号通路调控HBV复制（作者Ding XC等）持续存在的慢性HBV感染是引起HBV相关疾病发生发展的关键因素。目前机体HBV感染及其致癌过程的相关分子机制研究并不是很明确。

摘要： 【据《Hepatol Int》2018年7月报道】题：非酒精性肝脂肪变性减弱HBV免疫活性小鼠模型中的HBV复制（作者Hu D等）HBV感染与患者脂肪肝之间的关系仍不清楚。虽然高脂肪饮食诱导的肝脂肪变性被证明可以减少转基因小鼠的HBV复制,但免疫活性小鼠模型中HBV和脂肪肝之间的相互作用尚未阐明。

摘要： 目的：目前抗HBV的药物,由于存在较大的副作用及耐药性等问题,限制了其应用和远期疗效,寻求新型抗HBV药物具有重要意义。近年发现细胞空泡蛋白分选因子4(Vacuolar protein sorting,VPS4)是一种包膜病毒在细胞内复制和出芽所必需的宿主因子。且有报道提示VPS4显性负性(Dominant negative,DN)突变体可能也具有抑制HBV复制的作用。为进一步明确其抗HBV的作用及其机制,我们观察了VPS4B和其突变体在体外和体内的抗HBV效应,以及其对病毒复制生活周期不同阶段的影响,为寻求新的抗HBV的分子治疗手段奠定实验基础。rn 方法：以pXF3H为载体构建人VPS4B分子真核表达克隆,在此基础上进行定点诱变构建其显性负性突变体VPS4B--K1 80Q。分别与HBV可复制性克隆pHBV1.3共转染人肝癌细胞系Huh-7,采用时间分辨荧光免疫分析法定量检测细胞培养上清的中HBsAg和HBeAg含量,Southern blot检测细胞内HBV核衣壳相关DNA水平,RT-PCR法半定量检测HBV相关mRNA。并采用高压尾静脉注射的方式,将VPS4及其突变体导入到HBV急性感染小鼠肝脏内,real-time PCR法测定血清病毒载量,免疫组织化学染色观察肝细胞内HBcAg表达情况,明确其对体内HBV的抑制作用。rn 结果：VPS4B分子可抑制Huh-7细胞分泌HBsAg和HBeAg,VPS4B-K180Q对前述抗原分泌的抑制作用更明显,分别为野生型的2.8倍和5.0倍,P<0.05; 对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用也较强。VPS4B野生株和突变体均可有效抑制小鼠HBV病毒血症,注射后第5天HBV DNA载量分别为：6.54±0.8E6 eopies/ml、5.2±1.4E5copies/ml、8.3±1.2E7 copies/ml(对照组); P<0.05。肝组织HBchg免疫组化染色显示VPS4B-K180Q对HBV蛋白表达的抑制作用强于野生株。rn 结论：在体外和体内VPS4B分子及其显性负性突变体K180Q均可抑制HBV复制, 且后者的抑制作用更强。其抗HBV作用可发生在复制、转录、翻译阶段上,但以转录后环节为主。

摘要： 目的：目前抗HBV的药物,由于存在较大的副作用及耐药性等问题,限制了其应用和远期疗效,寻求新型抗HBV药物具有重要意义。近年发现细胞空泡蛋白分选因子4(Vacuolar protein sorting,VPS4)是一种包膜病毒在细胞内复制和出芽所必需的宿主因子。且有报道提示VPS4显性负性(Dominant negative,DN)突变体可能也具有抑制HBV复制的作用。为进一步明确其抗HBV的作用及其机制,我们观察了VPS4B和其突变体在体外和体内的抗HBV效应,以及其对病毒复制生活周期不同阶段的影响,为寻求新的抗HBV的分子治疗手段奠定实验基础。rn 方法：以pXF3H为载体构建人VPS4B分子真核表达克隆,在此基础上进行定点诱变构建其显性负性突变体VPS4B--K1 80Q。分别与HBV可复制性克隆pHBV1.3共转染人肝癌细胞系Huh-7,采用时间分辨荧光免疫分析法定量检测细胞培养上清的中HBsAg和HBeAg含量,Southern blot检测细胞内HBV核衣壳相关DNA水平,RT-PCR法半定量检测HBV相关mRNA。并采用高压尾静脉注射的方式,将VPS4及其突变体导入到HBV急性感染小鼠肝脏内,real-time PCR法测定血清病毒载量,免疫组织化学染色观察肝细胞内HBcAg表达情况,明确其对体内HBV的抑制作用。rn 结果：VPS4B分子可抑制Huh-7细胞分泌HBsAg和HBeAg,VPS4B-K180Q对前述抗原分泌的抑制作用更明显,分别为野生型的2.8倍和5.0倍,P<0.05; 对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用也较强。VPS4B野生株和突变体均可有效抑制小鼠HBV病毒血症,注射后第5天HBV DNA载量分别为：6.54±0.8E6 eopies/ml、5.2±1.4E5copies/ml、8.3±1.2E7 copies/ml(对照组); P<0.05。肝组织HBchg免疫组化染色显示VPS4B-K180Q对HBV蛋白表达的抑制作用强于野生株。rn 结论：在体外和体内VPS4B分子及其显性负性突变体K180Q均可抑制HBV复制, 且后者的抑制作用更强。其抗HBV作用可发生在复制、转录、翻译阶段上,但以转录后环节为主。

摘要： 目的：目前抗HBV的药物,由于存在较大的副作用及耐药性等问题,限制了其应用和远期疗效,寻求新型抗HBV药物具有重要意义。近年发现细胞空泡蛋白分选因子4(Vacuolar protein sorting,VPS4)是一种包膜病毒在细胞内复制和出芽所必需的宿主因子。且有报道提示VPS4显性负性(Dominant negative,DN)突变体可能也具有抑制HBV复制的作用。为进一步明确其抗HBV的作用及其机制,我们观察了VPS4B和其突变体在体外和体内的抗HBV效应,以及其对病毒复制生活周期不同阶段的影响,为寻求新的抗HBV的分子治疗手段奠定实验基础。rn 方法：以pXF3H为载体构建人VPS4B分子真核表达克隆,在此基础上进行定点诱变构建其显性负性突变体VPS4B--K1 80Q。分别与HBV可复制性克隆pHBV1.3共转染人肝癌细胞系Huh-7,采用时间分辨荧光免疫分析法定量检测细胞培养上清的中HBsAg和HBeAg含量,Southern blot检测细胞内HBV核衣壳相关DNA水平,RT-PCR法半定量检测HBV相关mRNA。并采用高压尾静脉注射的方式,将VPS4及其突变体导入到HBV急性感染小鼠肝脏内,real-time PCR法测定血清病毒载量,免疫组织化学染色观察肝细胞内HBcAg表达情况,明确其对体内HBV的抑制作用。rn 结果：VPS4B分子可抑制Huh-7细胞分泌HBsAg和HBeAg,VPS4B-K180Q对前述抗原分泌的抑制作用更明显,分别为野生型的2.8倍和5.0倍,P<0.05; 对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用也较强。VPS4B野生株和突变体均可有效抑制小鼠HBV病毒血症,注射后第5天HBV DNA载量分别为：6.54±0.8E6 eopies/ml、5.2±1.4E5copies/ml、8.3±1.2E7 copies/ml(对照组); P<0.05。肝组织HBchg免疫组化染色显示VPS4B-K180Q对HBV蛋白表达的抑制作用强于野生株。rn 结论：在体外和体内VPS4B分子及其显性负性突变体K180Q均可抑制HBV复制, 且后者的抑制作用更强。其抗HBV作用可发生在复制、转录、翻译阶段上,但以转录后环节为主。

摘要： 目的：目前抗HBV的药物,由于存在较大的副作用及耐药性等问题,限制了其应用和远期疗效,寻求新型抗HBV药物具有重要意义。近年发现细胞空泡蛋白分选因子4(Vacuolar protein sorting,VPS4)是一种包膜病毒在细胞内复制和出芽所必需的宿主因子。且有报道提示VPS4显性负性(Dominant negative,DN)突变体可能也具有抑制HBV复制的作用。为进一步明确其抗HBV的作用及其机制,我们观察了VPS4B和其突变体在体外和体内的抗HBV效应,以及其对病毒复制生活周期不同阶段的影响,为寻求新的抗HBV的分子治疗手段奠定实验基础。rn 方法：以pXF3H为载体构建人VPS4B分子真核表达克隆,在此基础上进行定点诱变构建其显性负性突变体VPS4B--K1 80Q。分别与HBV可复制性克隆pHBV1.3共转染人肝癌细胞系Huh-7,采用时间分辨荧光免疫分析法定量检测细胞培养上清的中HBsAg和HBeAg含量,Southern blot检测细胞内HBV核衣壳相关DNA水平,RT-PCR法半定量检测HBV相关mRNA。并采用高压尾静脉注射的方式,将VPS4及其突变体导入到HBV急性感染小鼠肝脏内,real-time PCR法测定血清病毒载量,免疫组织化学染色观察肝细胞内HBcAg表达情况,明确其对体内HBV的抑制作用。rn 结果：VPS4B分子可抑制Huh-7细胞分泌HBsAg和HBeAg,VPS4B-K180Q对前述抗原分泌的抑制作用更明显,分别为野生型的2.8倍和5.0倍,P<0.05; 对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用也较强。VPS4B野生株和突变体均可有效抑制小鼠HBV病毒血症,注射后第5天HBV DNA载量分别为：6.54±0.8E6 eopies/ml、5.2±1.4E5copies/ml、8.3±1.2E7 copies/ml(对照组); P<0.05。肝组织HBchg免疫组化染色显示VPS4B-K180Q对HBV蛋白表达的抑制作用强于野生株。rn 结论：在体外和体内VPS4B分子及其显性负性突变体K180Q均可抑制HBV复制, 且后者的抑制作用更强。其抗HBV作用可发生在复制、转录、翻译阶段上,但以转录后环节为主。

摘要： 目的：目前抗HBV的药物,由于存在较大的副作用及耐药性等问题,限制了其应用和远期疗效,寻求新型抗HBV药物具有重要意义。近年发现细胞空泡蛋白分选因子4(Vacuolar protein sorting,VPS4)是一种包膜病毒在细胞内复制和出芽所必需的宿主因子。且有报道提示VPS4显性负性(Dominant negative,DN)突变体可能也具有抑制HBV复制的作用。为进一步明确其抗HBV的作用及其机制,我们观察了VPS4B和其突变体在体外和体内的抗HBV效应,以及其对病毒复制生活周期不同阶段的影响,为寻求新的抗HBV的分子治疗手段奠定实验基础。rn 方法：以pXF3H为载体构建人VPS4B分子真核表达克隆,在此基础上进行定点诱变构建其显性负性突变体VPS4B--K1 80Q。分别与HBV可复制性克隆pHBV1.3共转染人肝癌细胞系Huh-7,采用时间分辨荧光免疫分析法定量检测细胞培养上清的中HBsAg和HBeAg含量,Southern blot检测细胞内HBV核衣壳相关DNA水平,RT-PCR法半定量检测HBV相关mRNA。并采用高压尾静脉注射的方式,将VPS4及其突变体导入到HBV急性感染小鼠肝脏内,real-time PCR法测定血清病毒载量,免疫组织化学染色观察肝细胞内HBcAg表达情况,明确其对体内HBV的抑制作用。rn 结果：VPS4B分子可抑制Huh-7细胞分泌HBsAg和HBeAg,VPS4B-K180Q对前述抗原分泌的抑制作用更明显,分别为野生型的2.8倍和5.0倍,P<0.05; 对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用也较强。VPS4B野生株和突变体均可有效抑制小鼠HBV病毒血症,注射后第5天HBV DNA载量分别为：6.54±0.8E6 eopies/ml、5.2±1.4E5copies/ml、8.3±1.2E7 copies/ml(对照组); P<0.05。肝组织HBchg免疫组化染色显示VPS4B-K180Q对HBV蛋白表达的抑制作用强于野生株。rn 结论：在体外和体内VPS4B分子及其显性负性突变体K180Q均可抑制HBV复制, 且后者的抑制作用更强。其抗HBV作用可发生在复制、转录、翻译阶段上,但以转录后环节为主。

摘要： 目的：目前抗HBV的药物,由于存在较大的副作用及耐药性等问题,限制了其应用和远期疗效,寻求新型抗HBV药物具有重要意义。近年发现细胞空泡蛋白分选因子4(Vacuolar protein sorting,VPS4)是一种包膜病毒在细胞内复制和出芽所必需的宿主因子。且有报道提示VPS4显性负性(Dominant negative,DN)突变体可能也具有抑制HBV复制的作用。为进一步明确其抗HBV的作用及其机制,我们观察了VPS4B和其突变体在体外和体内的抗HBV效应,以及其对病毒复制生活周期不同阶段的影响,为寻求新的抗HBV的分子治疗手段奠定实验基础。rn 方法：以pXF3H为载体构建人VPS4B分子真核表达克隆,在此基础上进行定点诱变构建其显性负性突变体VPS4B--K1 80Q。分别与HBV可复制性克隆pHBV1.3共转染人肝癌细胞系Huh-7,采用时间分辨荧光免疫分析法定量检测细胞培养上清的中HBsAg和HBeAg含量,Southern blot检测细胞内HBV核衣壳相关DNA水平,RT-PCR法半定量检测HBV相关mRNA。并采用高压尾静脉注射的方式,将VPS4及其突变体导入到HBV急性感染小鼠肝脏内,real-time PCR法测定血清病毒载量,免疫组织化学染色观察肝细胞内HBcAg表达情况,明确其对体内HBV的抑制作用。rn 结果：VPS4B分子可抑制Huh-7细胞分泌HBsAg和HBeAg,VPS4B-K180Q对前述抗原分泌的抑制作用更明显,分别为野生型的2.8倍和5.0倍,P<0.05; 对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用也较强。VPS4B野生株和突变体均可有效抑制小鼠HBV病毒血症,注射后第5天HBV DNA载量分别为：6.54±0.8E6 eopies/ml、5.2±1.4E5copies/ml、8.3±1.2E7 copies/ml(对照组); P<0.05。肝组织HBchg免疫组化染色显示VPS4B-K180Q对HBV蛋白表达的抑制作用强于野生株。rn 结论：在体外和体内VPS4B分子及其显性负性突变体K180Q均可抑制HBV复制, 且后者的抑制作用更强。其抗HBV作用可发生在复制、转录、翻译阶段上,但以转录后环节为主。

摘要： 动物模型是人们了解病毒复制、病毒感染自然史、病毒持续感染和致病的分子机制，研制有效抗病毒药物和疫苗不可或缺的工具。嗜肝DNA病毒不仅包括HBV，也包括其它动物的嗜肝病毒，如土拨鼠肝炎病毒(wHV)、鸭乙型肝炎病毒(DHBV)等。近年来，鸭、土拨鼠和转基因小鼠模型已被广泛用于HBV复制和发病机制研究、抗病毒药物和疫苗评价以及治疗慢性HBV感染新策略的实验性评估。

摘要： 动物模型是人们了解病毒复制、病毒感染自然史、病毒持续感染和致病的分子机制，研制有效抗病毒药物和疫苗不可或缺的工具。嗜肝DNA病毒不仅包括HBV，也包括其它动物的嗜肝病毒，如土拨鼠肝炎病毒(wHV)、鸭乙型肝炎病毒(DHBV)等。近年来，鸭、土拨鼠和转基因小鼠模型已被广泛用于HBV复制和发病机制研究、抗病毒药物和疫苗评价以及治疗慢性HBV感染新策略的实验性评估。

摘要： 动物模型是人们了解病毒复制、病毒感染自然史、病毒持续感染和致病的分子机制，研制有效抗病毒药物和疫苗不可或缺的工具。嗜肝DNA病毒不仅包括HBV，也包括其它动物的嗜肝病毒，如土拨鼠肝炎病毒(wHV)、鸭乙型肝炎病毒(DHBV)等。近年来，鸭、土拨鼠和转基因小鼠模型已被广泛用于HBV复制和发病机制研究、抗病毒药物和疫苗评价以及治疗慢性HBV感染新策略的实验性评估。

摘要： 动物模型是人们了解病毒复制、病毒感染自然史、病毒持续感染和致病的分子机制，研制有效抗病毒药物和疫苗不可或缺的工具。嗜肝DNA病毒不仅包括HBV，也包括其它动物的嗜肝病毒，如土拨鼠肝炎病毒(wHV)、鸭乙型肝炎病毒(DHBV)等。近年来，鸭、土拨鼠和转基因小鼠模型已被广泛用于HBV复制和发病机制研究、抗病毒药物和疫苗评价以及治疗慢性HBV感染新策略的实验性评估。

摘要： 本发明公开了一种携带外源基因的复制型HBV载体及该型载体转染细胞后产生的重组HBV，以及相应的制备方法与应用，所述载体是在原有表达HBV的质粒基础上，利用分子克隆技术将HBV基因组上重叠的C基因和P基因分开，各自形成完整开放读框，其间插入蛋白翻译起始序列或蛋白酶切位点，分别引导外源基因和P基因表达；携带外源基因的复制型HBV载体瞬时转染肝癌细胞后分泌重组HBV；本发明所提供的制备HBV载体转染细胞后，所产生的重组HBV能够在表达外源基因的同时，仍保留了复制和感染能力；本发明适用于构建HBV慢性感染动物模型、构建HBV的cccDNA稳定自主复制的细胞模型，构建可示踪的HBV病毒株，用于研究HBV感染，复制，包装等环节的分子机制，筛选抗HBV新药。

摘要： 本发明公开了一种20‑脱氧巨大戟二萜醇在制备抑制HBV复制的药物中的应用。本发明以该细胞模型为筛选工具，筛选到的天然化合物20‑脱氧巨大戟二萜醇，经研究表明，该化合物在细胞中，具有良好的抑制HBV复制的活性，进一步的作用机制研究显示，其作用机制是影响HBC二聚体形成，从而影响了核衣壳的形成；可将20‑脱氧巨大戟二萜醇用于乙肝治疗的研究中，开发新的以核衣壳作为靶点的抗HBV治疗药物，靶向核衣壳的药物既可能有效抑制病毒复制，又从药理上区别于现有核苷类药物，因而可能与核苷类药物联合使用或者在对核苷类药物耐药后进行替代治疗，同时缓解现有药物的耐药问题。

摘要： 本发明涉及抗HBV复制的靶向融合蛋白及其构建方法。利用乙型肝炎病毒核心蛋白HBc的C端区域（CTD）能与HBV cccDNA特异结合单的特性，将该肽段作为靶向cccDNA的引导分子，记为HBc144；合成A3A‑HBc144编码基因序列和HBc144‑UNG2的编码基因序列，并将这两段序列克隆到真核表达载体pVITRO2‑neo‑mcs的多克隆位点MCS1和MCS2上，构建成重组双表达载体Pvitro2‑A3A‑HBc/HBc‑UNG2，该重组载体在肝细胞中能同时表达两种融合蛋白，即A3A‑HBc144和HBc144‑UNG2本发明实现了A3A和UNG2对HBV cccDNA的靶向性，比单独表达A3A或A3A‑HBc的载体具有更强的抑制病毒复制的作用。

摘要： 本发明提供联合免疫基因抑制HBV复制的特异性sgRNA、表达载体及其应用：具体包括设计适合CRISPR‑Cas9靶向剪辑的人乙型肝炎病毒基因和PD‑1基因的sgRNA序列，构建抑制HBV和PD‑1基因sgRNA，将其与核酸酶基因的表达载体联合转入HBV转基因小鼠体内可以明显抑制HBV DNA的复制。本发明制备的基因表达载体方法步骤简单、sgRNA靶向性好、CRISPR‑Cas9系统的敲除效率高。因此，这些特异性靶向HBV和PD‑1基因的sgRNA可以精确剪接HBV和PD‑1基因，发挥抑制体内乙型肝炎病毒复制，降低乙肝病毒抗原表达的作用。

摘要： 本发明公开了INTS10基因/蛋白在抑制HBV基因复制或者预防或治疗HBV相关疾病中的用途。由此，使目的细胞例如肝脏细胞或肝癌细胞过表达INTS10基因，能够有效抑制肝脏细胞或肝癌细胞中HBV基因的复制，从而有效预防或治疗HBV相关疾病。

摘要： 本发明公开了一种携带外源基因的复制型HBV载体及该型载体转染细胞后产生的重组HBV，以及相应的制备方法与应用，所述载体是在原有表达HBV的质粒基础上，利用分子克隆技术将HBV基因组上重叠的C基因和P基因分开，各自形成完整开放读框，其间插入蛋白翻译起始序列或蛋白酶切位点，分别引导外源基因和P基因表达；携带外源基因的复制型HBV载体瞬时转染肝癌细胞后分泌重组HBV；本发明所提供的制备HBV载体转染细胞后，所产生的重组HBV能够在表达外源基因的同时，仍保留了复制和感染能力；本发明适用于构建HBV慢性感染动物模型、构建HBV的cccDNA稳定自主复制的细胞模型，构建可示踪的HBV病毒株，用于研究HBV感染，复制，包装等环节的分子机制，筛选抗HBV新药。

摘要： 本申请一般地涉及抑制HBV复制的某些取代吡咯嗪化合物和药物组合物，以及制备和使用其的方法。

摘要： 本发明公开了一种20‑脱氧巨大戟二萜醇在抑制HBV复制中的应用。本发明以该细胞模型为筛选工具，从包含586种合成化合物和天然化合物的化合物库中，筛选到的天然化合物20‑脱氧巨大戟二萜醇，经研究表明，该化合物在细胞中，具有良好的抑制HBV复制的活性，进一步的作用机制研究显示，其作用机制是影响HBC二聚体形成，从而影响了核衣壳的形成；可将20‑脱氧巨大戟二萜醇用于乙肝治疗的研究中，开发新的以核衣壳作为靶点的抗HBV治疗药物，靶向核衣壳的药物既可能有效抑制病毒复制，又从药理上区别于现有核苷类药物，因而可能与核苷类药物联合使用或者在对核苷类药物耐药后进行替代治疗，同时缓解现有药物的耐药问题。

摘要： 本发明涉及抗HBV复制的靶向融合蛋白及其构建方法。利用乙型肝炎病毒核心蛋白HBc的C端区域（CTD）能与HBV cccDNA特异结合单的特性，将该肽段作为靶向cccDNA的引导分子，记为HBc144；合成A3A‑HBc144编码基因序列和HBc144‑UNG2的编码基因序列，并将这两段序列克隆到真核表达载体pVITRO2‑neo‑mcs的多克隆位点MCS1和MCS2上，构建成重组双表达载体Pvitro2‑A3A‑HBc/HBc‑UNG2，该重组载体在肝细胞中能同时表达两种融合蛋白，即A3A‑HBc144和HBc144‑UNG2本发明实现了A3A和UNG2对HBV cccDNA的靶向性，比单独表达A3A或A3A‑HBc的载体具有更强的抑制病毒复制的作用。

摘要： 本发明提供联合免疫基因抑制HBV复制的特异性sgRNA、表达载体及其应用：具体包括设计适合CRISPR?Cas9靶向剪辑的人乙型肝炎病毒基因和PD?1基因的sgRNA序列，构建抑制HBV和PD?1基因sgRNA，将其与核酸酶基因的表达载体联合转入HBV转基因小鼠体内可以明显抑制HBV DNA的复制。本发明制备的基因表达载体方法步骤简单、sgRNA靶向性好、CRISPR?Cas9系统的敲除效率高。因此，这些特异性靶向HBV和PD?1基因的sgRNA可以精确剪接HBV和PD?1基因，发挥抑制体内乙型肝炎病毒复制，降低乙肝病毒抗原表达的作用。